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隨著內窺鏡的不斷進步,對內窺鏡圖像與組織圖像的關聯也進行了大量的研究。但是,在內窺鏡圖像和病理租織圖像的對比中,用系統的方法進行對比的例子很少。我們將內窺鏡圖像和病理組織圖像的一對一對應法作為KOTO method進行了報告,在本稿中解說了其詳細情況,對比的方法由以下3段組成。1)切出檢體時在水浸下拍攝整體照片以及利用體視顯微鏡的放大照片,2)通過重合組織像和整體像進行病變部位的位置對準,在此基礎上,將體視顯微鏡照片和組織像重合,用腺管單元進行對應。3)進一步使體視顯微鏡照片和內窺鏡照片相對應,可以進行組織像和內窺鏡照片的對比。希望這種有條不紊的詳細對比將有助于內窺鏡診斷的進一步提高。
I首先,
Ⅱ對比方法
隨著圖像增強內窺鏡和放大內窺鏡等內窺鏡的進行,內窺鏡診斷得到了飛快的提高。顯示了VS classification和JNET分類2等的內窺鏡部分,對內窺鏡圖像和組織像的連接也進行了很多研究。但是,進行內窺鏡圖像和病理組織像所采用的一對一的對比的例子很少。內窺鏡像和組織像的一對一對應在進行高精度的內窺鏡診斷上是很重要的,我們提出并報告了內窺鏡像和病理組織像的系統的一對一對應法作為KOTO method 3。這次,就該方法的詳細情況提出具體例子,并進行解說。
II 對比方法
具體的對比方法分為以下3個階段進行解說。
1) 福爾馬林固定后檢體的切出及攝影.
2) 立體顯微鏡照片和組織像的對比.
3) 按照內窺鏡照片和體視顯微鏡照片、組織像的對比的順序進行說明。
1)福爾馬林固定后檢體的切割及照片攝影
1.內窺鏡切除檢體固定和攝影
使用10%中性福爾馬林,貼在軟木板等漂浮的板上,在粘膜面向下的狀態下固定。固定后整個樣本的照片在水浸數碼相機(D7500.Nikon.通過Tokyo,Japan)進行攝影(Figure1)。由于水浸會使檢體表面的反射光消失,所以具有容易觀察表面結構等的優點,如果是比較小的檢體,在體視顯微鏡下拍攝“整體圖像的話,與大照片的對應就會很小。
Figure2的照片是實體顯微鏡(SZX16.OLYMPUS.Tokyo.這是使用Japan)和顯微鏡用照相機(DP20.OLYMPUS)拍攝的整體圖像。
2、切割與染色
在標本上間隔2-3毫米的距離,此時只對粘膜進行割開,注意不對粘膜下層進行切開(圖3)如果將標本完全切開的話,各切片會產生偏差,因此表面會出現不好看的結構,相反,如果分割過淺的話,在分離時也有不能切斷相同部位的情況,有必要充分切入粘膜深層。再次在水中浸泡粘膜狀態的標本,拍攝整體照片以及病變中心區域的體視顯微鏡照片(Figure4).
在稀釋到0.5%左右的龍膽紫中浸泡數秒,立即水洗。通過龍膽紫染色,由于表面結構變得清晰,所以體視顯微鏡像和內鏡像的對應以及體視顯微鏡像和圖像強調內窺鏡像變得容易對應。龍膽紫染色后的標本:在水下拍攝整體照片,拍攝放大我們需要區域的體視顯微鏡照片(Figure5)。
我們在放大照片的拍攝中使用了體視顯微鏡,但是也可以用分辨率高的數碼相機等進行拍攝來代替。3.進行標本的切割和標本作照片拍攝后,將標本的粘膜下屋進行切割,制作標本.將切出的標本從斜向立體顯微鏡通過拍攝照片,也可以大體觀察從表面察覺到的血管深度(Figure6-a,b)。
標本制作時,盡量形成筆直的形狀(與攝影時相同的形狀)。標本處理需要注意。在制作病理標本時,由于包埋時的類型決定了大小,所以長度超過的標本在彎曲的狀態下需要進行標本制作。但是,在彎曲的標本中,由于下述行程2)以下的對應變得困難,所以需要進行適當的切割,努力制作筆直的書(切割時推薦用切割部位的切割的狀熊拍攝上述照片)。
2) 實體顯微鏡照片和組織像的對比
這次,實體顯微鏡照片和組織像的重疊,用Windows10的電腦進行圖像處理軟件(Adobe Photoshop Elements15.Adobe Systems San Jose。組織照片為L(APERIO AT2.LeicaBiosystems,Nussloch.German)。在JPEGSL作為TIF文件保存L后,將一頁像和各部位的放大像保存((Aperio ImageScope.12.0.1.5027,Leica Biosystems,用于以下的對比。
1. 標本整體像和組織像的重合
首先,將標本的整體像和標本的組織像的照片重合,進行整體的位置對準(Figure7)。
使用Photoshop按照下述1~5的順序進行重合。①、在Photoshop中打開檢體的整體照片和組織標本的標簽像,在工科SPA一托一處使用左側的一圈自動選擇一勒,選擇標本的背景(此時,將容許值設定為與標本很好地從背景區別開來的情況。在這次的病例中,容許值為20)。
②點擊上菜單的選擇范圍內的“選擇范圍項”,將標本方定為選擇范圍。③選擇菜單放在一塊。④其次,切換為整體照片編輯,貼上組織的圖像。⑤在選擇像,將方形的彈跳框放在大、小組織像,標本整體像的長度是擴大、縮小,標本的整體像的長度是四方的為了是組織像與之相配,旋轉使組織像與方向一致,將空隙移到UNING POCKS的外側,成為指示燈指向的方向的箭頭)和拖動使之旋轉的1個作品,因此切割標本(比切片時切入數百um-1mm程度的部位成為實際標本將所有的長度、標記部分和樣品的寬度結合起來,推測實際的標本制作部位
2、關注領域的平衡
接著,1)1.采用與①-⑤相同的方法將病變區域放大后的實體照片與組織的合稱《Figure 8-a,b.)一邊考慮整體的位置,一邊將標記和標本表面的合稱,尋找凹凸不平、腺管開口的部位。如果實體顯微鏡以及組織都可插入,則將尺寸大致對齊后再重合,或者尋找部位相交處會變得比較容易。但是,在本作過程中,也有脫水和石蠟切片伸展等過程,檢查由于標本的比例尺寸不一定與切出時一致,所以根據需要用特殊的粘膜凹凸等進行對應并進行修正。通過將色素染色前和染色后的照片重合,也可以同時得到表面結構和血管的情況(Figure9)。在攝影的照片上擺放組織像。血管深度的一部分也變得容易(Figure10)。
3)內窺鏡照片和體顯微鏡照片、組織像的對比
1.與內窺鏡照片的對比標志的位置和特殊的表面微結構、血管等相對應.。將立體顯微鏡照片(Figure11-a,b)和內窺鏡照片(Figure11-c,d)進行比較。實體顯微鏡照片推定的實際的標本對應部位的內窺鏡照片上粗照片左重對齊,使之對應(Figure11-b,d.內視鏡是與顯微鏡頭類似的圖像,特別是在邊緣部會產生變形,因此,從使其成對的實體顯微鏡照片中的腺管的位置費系,進行了實際的標本作品。使制面和病變的范圍等相對應。內窺鏡照片是否可以在接近正面觀察的狀態下拍攝,另外,根據是否有特征性的構造物,對比所需的勞力會發生很大的變化。在1)~3)中以組織為媒介的對比方法,如果在切割時進行浸水下的照片拍攝的話,只用通常的病理診斷業務中使用的HE標本就可以進行對比。但是,關于標本的切割復原圖部分,不得不從組織的形態來推測。因為沒有得到。這一點改良了,KOTO methodⅡ的對比方法!由岸本等人提出。
Ⅲ結語:
以內窺鏡圖像和病理組像的系統的一對一對法為媒介,通過詳細的對比,將組織像的內窺鏡圖像轉移到內窺鏡圖像上,以組織學的根據為基礎的內窺鏡診斷有望得到進一步的發展。